Luận án Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây Đậu tương (Glycine max (L.) Merrill)

 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM 
NGÔ MẠNH DŨNG 
NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN codA NHẰM NÂNG CAO 
KHẢ NĂNG CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƯƠNG 
 (Glycine max (L.) Merrill) 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC 
THÁI NGUYÊN - 12/2021 
 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM 
NGÔ MẠNH DŨNG 
NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN codA NHẰM NÂNG CAO 
KHẢ NĂNG CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƯƠNG 
 (Glycine max (L.) Merrill) 
Ngành: Di truyền học 
Mã số: 9420121 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC 
Người hướng dẫn khoa học: 
1. PGS. TS Chu Hoàng Hà 
2. GS.TS Chu Hoàng Mậu 
THÁI NGUYÊN - 12/2021 
i 
LỜI CAM ĐOAN 
Tôi xin cam đoan luận án là công trình nghiên cứu của tôi dưới sự hướng dẫn của 
PGS.TS Chu Hoàng Hà và GS.TS. Chu Hoàng Mậu. Các kết quả nghiên cứu trình bày 
trong luận án là trung thực và mọi trích dẫn đều ghi rõ nguồn gốc. Một phần kết quả đã 
được công bố trên các tạp chí và hội nghị khoa học chuyên ngành với sự đồng ý và 
cho phép của các đồng tác giả, phần còn lại chưa được công bố trong bất kỳ công trình 
nào khác. 
Tôi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn về các kết quả đã trình bày trong luận án. 
Thái Nguyên, tháng 12 năm 2021 
TÁC GIẢ 
Ngô Mạnh Dũng 
ii 
LỜI CẢM ƠN 
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất tới PGS.TS Chu Hoàng Hà và GS.TS. 
Chu Hoàng Mậu, người đã trực tiếp hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ, động viên tôi 
có được sự tự tin, khắc phục khó khăn để hoàn thành tốt bản luận án này. 
Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới PGS.TS. Phạm Bích Ngọc, TS. Đỗ 
Tiến Phát, ThS Tạ Thị Đông, ThS Nguyễn Hồng Nhung và các cán bộ, nghiên cứu 
viên phòng Công nghệ ADN ứng dụng, phòng Công nghệ tế bào thực vật và phòng 
thí nghiệm trọng điểm Công nghệ gen thuộc Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn 
lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ, tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi 
có thể hoàn thành các thí nghiệm nghiên cứu thuộc đề tài luận án. 
Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô và cán bộ trong bộ môn Di truyền học 
và Công nghệ sinh học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái 
Nguyên đã giúp tôi tích lũy nhiều kiến thức, phương pháp nghiên cứu về các vấn đề 
hiện đại của sinh học và công nghệ sinh học, đồng thời đưa ra nhiều đóng góp quý 
báu để tôi có thể hoàn thành kế hoạch học tập và nghiên cứu. 
Tôi xin cảm ơn các thầy cô giáo, cán bộ Khoa Sinh học, Phòng Đào tạo, Bộ 
phân đào tạo Sau đại học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên đã giúp 
đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành khoá học này. 
Tôi xin bày tỏ lòng tri ân và biết ơn sâu sắc tới thầy cô, gia đình, bạn bè, đồng 
nghiệp đã giúp đỡ, động viên và chia sẻ khó khăn trong suốt chặng đường học tập, 
nghiên cứu của tôi thời gian qua. 
Thái Nguyên, tháng 12 năm 2021 
TÁC GIẢ 
Ngô Mạnh Dũng 
iii 
MỤC LỤC 
Lời cam đoan .......................................................................................................... i 
Lời cảm ơn ............................................................................................................ ii 
Mục lục................................................................................................................. iii 
Danh mục các chữ viết tắt ..................................................................................... vi 
Danh mục hình ..................................................................................................... ix 
Danh mục bảng ..................................................................................................... xi 
MỞ ĐẦU .............................................................................................................. 1 
Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .................................................................. 6 
1.1. TÁC ĐỘNG CỦA HẠN VÀ CƠ CHẾ CHỊU HẠN Ở THỰC VẬT ........................ 6 
1.1.1. Ảnh hưởng của stress hạn đến sự sinh trưởng, phát triển và đặc tính sinh lý, 
sinh hoá của thực vật ................................................................................................................. 6 
1.1.2. Phản ứng của thực vật trong điều kiện stress hạn ....................................................... 11 
1.2. GLYCINE BETAINE, CHOLINE OXIDASE ...................................................... 18 
1.2.1. Glycine betaine.............................................................................................................. 18 
1.2.2. Choline oxidase ............................................................................................................. 23 
1.3. NÂNG CAO KHẢ NĂNG CHỊU HẠN Ở ĐẬU TƯƠNG BẰNG KỸ THUẬT 
CHUYỂN GEN ............................................................................................................. 29 
1.3.1. Cây đậu tương ............................................................................................................... 29 
1.3.2. Chuyển gen ở đậu tương thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens .............. 31 
1.3.3. Nâng cao khả năng chịu hạn ở đậu tương bằng kỹ thuật chuyển gen ....................... 33 
1.3.4. Tình hình nghiên cứu chuyển gen codA ở thực vật .................................................... 38 
Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ..........................46 
2.1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .................................................................................... 46 
2.1.1. Vật liệu thực vật ............................................................................................................ 46 
2.1.2. Các chủng vi khuẩn và các loại vector ........................................................................ 46 
2.1.3. Các cặp mồi sử dụng cho phản ứng PCR .................................................................... 46 
2.2. HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ ......................................................................................... 48 
2.2.1. Hoá chất ......................................................................................................................... 48 
iv 
2.2.2. Thiết bị ........................................................................................................................... 48 
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .......................................................................... 49 
2.3.1. Nhóm phương pháp thiết kế vector chuyển gen codA và chuyển gen ở thuốc lá ..... 49 
2.3.2. Nhóm phương pháp nghiên cứu điều kiện thích hợp cho chuyển gen ở giống 
đậu tương ĐT22 ...................................................................................................................... 53 
2.3.3. Nhóm phương pháp tạo cây đậu tương chuyển gen codA ......................................... 55 
2.3.4. Phân tích và xử lý dữ liệu ............................................................................................. 60 
2.4. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU ........................................................ 61 
Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN ................................62 
3.1. THIẾT KẾ VÀ BIỂU HIỆN VECTOR CHUYỂN GEN MANG GEN CODA ....... 62 
3.1.1. Tạo cấu trúc chuyển gen codA ..................................................................................... 62 
3.1.2. Đánh giá hoạt động của vector mang gen chuyển codA trên cây thuốc lá ................ 66 
3.1.3. Thảo luận kết quả thiết kế vector và hoạt động của vector biểu hiện trên cây 
thuốc lá .......................................................................................................................... 69 
3.2. ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN HIỆU QUẢ CHUYỂN GEN 
CODA Ở GIỐNG ĐẬU TƯƠNG ĐT22 ......................................................................... 72 
3.2.1. Ảnh hưởng của nồng độ PPT đến khả năng tạo chồi đậu tương ............................... 73 
3.2.2. Ảnh hưởng của nồng độ khuẩn và thời gian ủ khuẩn, đồng nuôi cấy đến khả 
năng cảm ứng tạo chồi đậu tương .......................................................................................... 74 
3.2.3. Ảnh hưởng của nồng độ kháng sinh và thời gian diệt khuẩn đến sự phát sinh và 
sinh trưởng chồi đậu tương ..................................................................................................... 78 
3.2.4. Thảo luận kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến hiệu quả 
chuyển gen codA ở giống đậu tương ĐT22 ........................................................................... 79 
3.3. BIẾN NẠP GEN CODA VÀO GIỐNG ĐẬU TƯƠNG ĐT22 VÀ TẠO CÂY 
ĐẬU TƯƠNG CHUYỂN GEN CHỊU HẠN ................................................................ 82 
3.3.1. Kết quả chuyển gen codA vào giống đậu tương ĐT22 .............................................. 82 
3.3.2. Phân tích cây đậu tương chuyển gen ........................................................................... 84 
3.3.3. Thử nghiệm đánh giá khả năng chịu hạn của một số dòng đậu tương chuyển 
gen ............................................................................................................................................ 90 
v 
3.3.4. Thảo luận kết quả biến nạp gen codA vào giống đậu tương ĐT22 và thử nghiệm 
khả năng chịu hạn của một số dòng đậu tương chuyển gen ................................................. 98 
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ........................................................................... 101 
CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN ................... 102 
TÀI LIỆU THAM KHẢO ................................................................................ 103 
vi 
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 
ABA Abscisic acid 
APX Ascorbate peroxidase 
BADH Betaine aldehyde dehydrogenase 
BAP 6-benzyladenine purin 
bar Bialaphos resistance 
bp Base pair Cặp base 
CAM Crassulacean acid metabolism 
CAT Catalase 
CCM Cocultivation medium Môi trường đồng nuôi cấy 
CHDH Choline dehydrogenase 
CMO Choline monooxygenase 
COD Choline oxidase 
codA Choline oxidase from Agrobacterium globiformis 
CTAB Cetyltrimethyl ammonium bromide 
DHAR Dehydroascorbate reductase 
DNA Deoxyribonucleic acid 
dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate 
DW Dry weight Khối lượng khô 
ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 
FAD Flavin adenine dinucleotide 
FW Fresh weight Khối lượng tươi 
GA3 Gibberellic acid 
GB Glycine Betaine 
GM Germination medium Môi trường nảy mầm 
HSP Heat shock protein 
vii 
IAA Indoleacetic acid 
IBA Indole-3-butyric acid 
kb Kilo base 
kDa Kilo Dalton 
LB Luria Bertani 
Môi trường dinh dưỡng cơ 
bản nuôi cấy vi khuẩn 
LEA Late embryogenesis abundant 
MAPK Microtubule associated protein kinase 
MDA Malondialdehyde 
MDHAR Monodehydroascorbate reductase 
MES 2-(N-Morpholino)ethanesulfonic 
MS Murashige and Skoog 
Môi trường dinh dưỡng 
cơ bản MS 
mRNA Messenger ribonucleic acid 
NAA α-Naphthaleneacetic acid 
OD Optical density Mật độ quang 
pat Phosphinothricin acetyltransferase 
PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi polymerase 
PEAMT phosphoethanolamine N-methyltransferase 
PEG Polyethylene glycol 
PEPC Phosphoenolpyruvate carboxylase 
PHBH p-hydroxybenzoate hydroxylase 
POD Peroxidase 
PPT Phosphinothricin 
r ... culture & 
Environment. 11(3&4), pp. 1358-1363. 
168. Yang J., Xing G., Sui L., Guo D., Niu L., Yang X. (2016), "Effects of 
different soybean genotypes on the transformation efficiency of soybean and 
analysis of the T-DNA insertions in the soybean genome", Soybean Science. 
35(4), pp. 562-567. 
169. Yang X., Lu M., Wang Y., Wang Y., Liu Z., Chen S. (2021), "Response 
Mechanism of Plants to Drought Stress", Horticulturae. 7(3), p. 50. 
170. York L.M., Carminati A., Mooney S.J., Ritz K., Bennett M.J. (2016), "The 
holistic rhizosphere: integrating zones, processes, and semantics in the soil 
124 
influenced by roots", Journal of experimental botany. 67(12), pp. 3629-
3643. 
171. You L., Song Q., Wu Y., Li S., Jiang C., Chang L., Yang X., Zhang J. 
(2019), "Accumulation of glycine betaine in transplastomic potato plants 
expressing choline oxidase confers improved drought tolerance", Planta. 
249(6), pp. 1963-1975. 
172. Yu X., Kikuchi A., Matsunaga E., Morishita Y., Nanto K., Sakurai N., 
Suzuki H., Shibata D., Shimada T., Watanabe K.N. (2009), "Establishment 
of the evaluation system of salt tolerance on transgenic woody plants in the 
special netted-house", Plant Biotechnology. 26(1), pp. 135-141. 
173. Yu Y., Liang H., Wang S., Lian Y., Wei Y., Wang T. (2010), "Research 
progress and commercialization on transgenic soybean in China", Soybean 
Science. 29, pp. 143-150. 
174. Zargar S.M., Gupta N., Nazir M., Mahajan R., Malik F.A., Sofi N.R., 
Shikari A.B., Salgotra R. (2017), "Impact of drought on photosynthesis: 
Molecular perspective", Plant Gene. 11, pp. 154-159. 
175. Zhang T., Li Z., Li D., Li C., Wei D., Li S., Liu Y., Chen T.H., Yang X. 
(2020), "Comparative effects of glycinebetaine on the thermotolerance in 
codA-and BADH-transgenic tomato plants under high temperature stress", 
Plant Cell Reports. 39(11), pp. 1525-1538. 
176. Zhang T., Liang J., Wang M., Li D., Liu Y., Chen T.H., Yang X. (2019), 
"Genetic engineering of the biosynthesis of glycinebetaine enhances the fruit 
development and size of tomato", Plant Science. 280, pp. 355-366. 
177. Zhao X., Li G., Liang S. (2013), "Several affinity tags commonly used in 
chromatographic purification", Journal of analytical methods in chemistry. 
2013(581093), pp. 1-8. 
178. Zheng G., Fan C., Di S., Wang X., Xiang C., Pang Y. (2017), "Over-
expression of Arabidopsis EDT1 gene confers drought tolerance in alfalfa 
125 
(Medicago sativa L.)", Frontiers in plant science. 8(2125), pp. 1-14. 
179. Zoz T., Steiner F., Guimarães V.F., Castagnara D.D., Meinerz C.C., Fey R. 
(2013), "Peroxidase activity as an indicator of water deficit tolerance in 
soybean cultivars", Bioscience Journal. 29(5), pp. 1664-1671. 
180. Zulfiqar F., Younis A., Riaz A., Mansoor F., Hameed M., Akram N.A., 
Abideen Z. (2020), "Morpho-anatomical adaptations of two Tagetes erecta 
L. cultivars with contrasting response to drought stress", Pakistan Journal of 
Botany. 52(3), pp. 801-810. 
PHỤ LỤC 
Phục lục 1. Gen codA tổng hợp nhân tạo và gen codA của A. globiformis 
P1.1. Trình tự gen codA tổng hợp nhân tạo và gen codA của A. globiformis [79] 
P1.2. So sánh trình tự amino acid của choline oxidase mã hóa bởi gen codA tổng hợp 
nhân tạo với gen codA của A. globiformis [79] 
Phục lục 2. Quy trình chuyển gen codA vào giống đậu tương ĐT22 
Bước 1: Chuẩn bị vật liệu chuyển gen 
- Hạt đậu tương được khử trùng bằng khí clo, sau đó được gieo trên môi 
trường GM. 
5 -7 ngày 
Bước 2: Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A. tumefaciens 
- Nuôi cấy tạo khuẩn lạc từ khuẩn trừ ở -80°C 
- Nuôi lỏng khuẩn từ khuẩn lạc đơn 
- Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A. tumefaciens C58 đến OD650 0,6 
2-3 ngày 
Bước 3: Gây nhiễm và đồng nuôi cấy 
- Loại bỏ thân mầm và rẻ mầm của hạt đậu tương 
- Tách dọc hai lá mầm, loại bỏ đỉnh sinh trường, tạo 3- 5 vết thương trên 
lá mầm tại vị trí đã loại bỏ định sinh trưởng 
- Ngâm lá mầm đã tổn thương trong dịch huyền phù vi khuẩn 30 phút 
- Đồng nuôi cấy 5 ngày trên môi trường CCM, trong tối hoàn toàn 25°C 
Bước 4: Diệt khuẩn, cảm ứng tạo đa chồi và chọn lọc 
- Diệt khuẩn bằng cefotaxime 500 mg/l trong 10 phút 
- Tạo chồi trên môi trường tạo chồi chứa cefotaxime 500mg/l 
- Chọn lọc chồi trên môi trường SIM có PPT 3 mg/l và cefotaxime 
500mg/l. 
28 ngày 
Bước 5: Tái sinh cây hoàn chỉnh 
- Các cụm chồi chọn lọc được kéo dài chồi trên môi trường SEM có PPT 
1,5 mg/l và cefotaxime 500 mg/l 
- Chồi dài 3-5 cm được cắt và cấy trên môi trường RM có cefotaxime 250 
mg/1 để tạo cây hoàn chỉnh 
60- 90 ngày 
Bước 6: Ra cây trong nhà lưới 
- Cây hoàn chỉnh in vitro được trồng trên giá thể TN1 trộn với Tribat theo 
tỷ lệ 3:1 
20 – 30 ngày 
120 – 160 ngày 
5 ngày 
Bước 1. Chuẩn bị vật liệu chuyển gen 
Hạt đậu tương (ĐT22) to tròn đều, màu vàng sáng, vỏ hạt không bị nứt được 
chọn làm vật liệu chuyển gen. Hạt chín được khử trùng bằng khí Chlore (Cl2) đây 
là chất độc cực mạnh và có khả năng khử trùng cao, khí clo được tạo ra bằng cách 
bổ sung 3 ml HCl đậm đặc vào 100 ml javen thương phẩm. Việc khử trùng được 
thực hiện trong một bình kín và đặt trong tủ hút 14- 16 giờ. Sau khi khử trùng, hạt 
được gieo trên môi trường GM trong các thời gian 5-7 ngày. 
Bước 2. Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A. tumefaciens 
Nuôi cấy tạo khuẩn lạc: cấy trải A. tumefaciens mang gen codA từ ống giữ 
chủng lên môi trường YEP đặc, có bổ sung kháng sinh phù hợp, nuôi trong tủ ổn 
nhiệt 28oC trong thời gian 48 giờ. 
Nuôi lỏng khuẩn: dùng que cấy chọn một khuẩn lạc riêng biệt trên đĩa khuẩn 
cấy vào môi trường YEP lỏng bổ sung các loại kháng sinh như nuôi đặc. Bình nuôi 
lỏng được lắc 200 v/p ở 28oC trong 16 giờ ở điều kiện tối hoàn toàn. 
Tạo dịch huyền phù vi khuẩn: dịch khuẩn thu từ quá trình nuôi lỏng được hòa 
loãng 2 - 3 lần và tiếp tục nuôi phục hồi 2 - 4 giờ. Sau đó dịch khuẩn được ly tâm ở 
5000 v/p trong 10 phút ở 4oC. Loại bỏ phần dịch nổi và hòa tan cặn khuẩn trong 
môi trường CCM lỏng có bổ sung acetosyrigone để đạt mật độ huyền phù vi khuẩn 
OD650 0,6. 
Các loại môi trường sử dụng cho quá trình nuôi cấy tạo dịch huyền phù vi khuẩn 
gồm: môi trường nuôi khuẩn đặc, môi trường nuôi khuẩn lỏng và môi trường tạo 
dịch huyền phù vi khuẩn. 
Bước 3. Gây nhiễm và đồng nuôi cấy: 
Hạt đậu tương sau 5-7 ngày gieo, phần thân mầm và rễ mầm bị loại bỏ, hai lá 
mầm được tách ra, đỉnh sinh trưởng bị loại bỏ, tạo 3-5 vết thương trên lá mầm tại vị 
trí đã loại bỏ đỉnh sinh trưởng. Lá mầm sau khi tạo tổn thương được ngâm trong 
dịch huyền phù vi khuẩn trong thời gian 30 phút. Tiếp theo, mẫu được đặt trên môi 
trường đồng nuôi cấy đặt các mẫu ở 25oC trong điều kiện tối thời gian là 5 ngày. 
Bước 4. Diệt khuẩn, cảm ứng tạo đa chồi và chọn lọc: 
Mẫu biến nạp sau thời gian đồng nuôi cấy được lắc trong môi trường SIM 
lỏng có bổ sung cefotaxime 500 mg/l trong 10 phút, sau đó thấm khô bằng giấy 
thấm khử trùng và cấy mẫu lên môi trường tạo chồi có bổ sung cefotaxime 500 
mg/l. Sau 2 tuần, mẫu được chuyển sang môi trường chọn lọc SIM có bổ sung 
cefotaxime 500 mg/l, PPT 3 mg/l và nuôi trong 2 tuần. 
Bước 5. Tái sinh cây hoàn chỉnh: 
Các cụm chồi được tạo ra trên môi trường chọn lọc SIM được chuyển sang 
môi trường kéo dài chồi SEM có bổ sung 500 mg/l cefotaxime và 1,5 mg/l PPT. 
Các chồi phát triển đạt chiều cao từ 3 - 5 cm được cắt và cấy trên môi trường ra rễ 
RM có bổ sung cefotaxime 250 mg/l để tạo cây hoàn chỉnh. 
Bước 6. Ra cây trong nhà lưới: 
Khi cây in vitro có 3 lá, có bộ rễ đảm bảo (thường sau 2 tuần nuôi cấy) được 
lấy ra khỏi bình nuôi cấy, rửa sạch phần agar bám trên rễ và trồng trên giá thể TN1 
trộn với Tribat theo tỷ lệ 3:1. Cây sống sót trên giá thể được đưa ra chậu đất có bổ 
sung phân bón trong điều kiện nhà lưới. Khi cây xuất hiện các lá mới, PPT 250mg/l 
được phết lên lá nhằm đánh giá biểu hiện của gen chọn lọc (bar). Mẫu lá của cây 
chuyển gen cũng được thu thập và phân tích bằng các đánh giá ở mức độ phân tử. 
Phụ lục 3. Kết quả kiểm tra PPT 250mg/l và PCR các dòng T0, T1 
P3.1. Kết quả kiểm tra các dòng rd29A-codA T0, T1 bằng PPT 250mg/l và PCR 
T0 T1 
STT Tên dòng PCR PPT Tên dòng PPT PCR Số hạt thu 
1 rd29A-codA 1 - + + 
rd29A-codA 1.1 - - - - 
rd29A-codA 1.2 - - - - 
2 rd29A-codA 2 + + + + rd29A-codA 2.1 + + + + 100 - 150 
3 rd29A-codA 3 + - + + rd29A-codA 3 + + + + 100 - 150 
4 rd29A-codA 4 + + + 
rd29A-codA 4.1 - - - - 
rd29A-codA 4.2 + + + + 100 - 150 
5 rd29A-codA 5 + + + 
rd29A-codA 5.1 - + - - 
rd29A-codA 5.2 + - - - 
rd29A-codA 5.3 - - - - 
6 rd29A-codA 6 + + + + 
rd29A-codA 6.1 - - - - 
rd29A-codA 6.2 - - - - 
rd29A-codA 6.3 - - - - 
7 rd29A-codA 7 + + + + 
rd29A-codA 7.1 - - + + 100 - 150 
rd29A-codA 7.2 - - - - 
8 rd29A-codA 8 + + + + 
rd29A-codA 8.1 - - - - 
rd29A-codA 8.2 - - - - 
9 rd29A-codA 9 + + + + rd29A-codA 9 - - - - 
10 
rd29A-codA 
10 
+ + + 
rd29A-codA 10.1 - - - - 
rd29A-codA 10.2 - - - - 
-: Kết quả âm tính; +: Kết quả dương tính; 
P3.2. Kết quả kiểm tra các dòng 35S-codA T0, T1 bằng PPT 250mg/l và PCR 
T0 T1 
STT Tên dòng PCR PPT Tên dòng PPT PCR Số hạt thu 
1 35S-codA 2 + - + 
 35S-codA 2.1 - - - - 
 35S-codA 2.2 - - - - 
 35S-codA 2.3 - - - - 
2 35S-codA 6 + + 
35S-codA 6.1 - - - - 
35S-codA 6.2 - - - - 
35S-codA 6.3 - - - - 
3 35S-codA 7 + + + 
35S-codA 7.1 - - - - 
35S-codA 7.2 - - - - 
35S-codA 7.3 - - - - 
4 35S-codA 8 + - + 
35S-codA 8.1 - - - - 
35S-codA 8.2 - - - - 
35S-codA 8.3 - - - - 
35S-codA 8.4 - - - - 
5 35S-codA 9 + - + 
35S-codA 9.1 - - - - 
35S-codA 9.2 - - - - 
35S-codA 9.3 - - - - 
6 35S-codA 11 - + + 
35S-codA 11.1 - - - - 
35S-codA 11.2 - - - - 
35S-codA 11.3 - - - - 
7 35S-codA 13 - + + 
35S-codA 13.1 - - - - 
35S-codA 13.2 - - - - 
T0 T1 
STT Tên dòng PCR PPT Tên dòng PPT PCR Số hạt thu 
35S-codA 13.3 - - - - 
8 35S-codA 20 + + 
35S-codA 20.1 - - - - 
35S-codA 20.2 - - - - 
35S-codA 20.3 - - - - 
9 35S-codA 23 - + + 
35S-codA 23.1 - - - - 
35S-codA 23.2 - - - - 
35S-codA 23.3 - - - - 
35S-codA 23.4 - - - - 
10 35S-codA 27 + - + 
35S-codA 27.1 - - - - 
35S-codA 27.2 - - - - 
35S-codA 27.3 - - - - 
-: Kết quả âm tính; +: Kết quả dương tính; 
P3.3. Kết quả kiểm tra các dòng HSP-codA T0, T1 bằng PPT 250mg/l và PCR 
T0 T1 
STT Tên dòng PCR PP
T 
Tên dòng PPT PCR Số hạt thu 
1 HSP-codA 1 + + + 
HSP-codA 1.1 - - - - 
HSP-codA 1.2 - - - - 
2 HSP-codA 3 + + + 
HSP-codA 3.1 - - - - 
HSP-codA 3.1 - - - - 
HSP-codA 3.2 + + + + 250 -300 
HSP-codA 3.3 - - - - 
3 HSP-codA 4 - + + - 
HSP-codA 4.1 - - - - 
HSP-codA 4.2 - - - - 
HSP-codA 4.3 - - - - 
4 HSP-codA 5 + - + + HSP-codA 5 - - - - 
5 HSP-codA 6 + + + + HSP-codA 6 - - - - 
6 HSP-codA 8 - + 
HSP-codA 8.1 - - - - 
HSP-codA 8.2 - - - - 
HSP-codA 8.3 - - - - 
7 HSP-codA 11 - + + + HSP-codA 11 + + + + 4 
8 HSP-codA 12 + + HSP-codA 12 - - - - 
9 HSP-codA 14 - + + 
HSP-codA 14.1 - - - - 
HSP-codA 14.2 - - - - 
10 HSP-codA 17 - - + - 
HSP-codA 17.1 - - - - 
HSP-codA 17.2 - - - - 
HSP-codA 17.3 - - - - 
HSP-codA 17.4 - - - - 
-: Kết quả âm tính; +: Kết quả dương tính;